هنا، قمنا بتأسيس sCRAM (النموذج المجاور للفاصل الأولي دون المستوى الأمثل (PAM)-بوساطة CRISPR RNA وCas12a nuclease مع التضخيم السريع متساوي الحرارة متعدد الإنزيمات)، وهي منصة تشخيصية سريعة ومجانية للاستخراج- تكتشف ASFV في غضون 20 دقيقة. يدمج sCRAM خطوة إطلاق سريع للحمض النووي (40 درجة، 5 دقائق) مع تفاعل أنبوبي واحد يجمع بين التضخيم متساوي الحرارة متعدد الإنزيمات (MIRA) وCRISPR/ CRISPR/
نظام Cas12a (37 درجة، 15 دقيقة)، تمكين القراءة المرئية المجانية للأداة - عبر ضوء الأشعة فوق البنفسجية أو شرائط التدفق الجانبي (LFS). يُظهر sCRAM حساسية اكتشاف نسخة واحدة - ولا يظهر أي تفاعل متقاطع مع خمسة مسببات أمراض الخنازير الشائعة (PRRSV، PPV، JEV، PCV، وPRV). كشف تقييم 111 عينة محاكاة وسريرية (بما في ذلك الدم والبلازما والمسحات) عن توافق بنسبة 100% مع qPCR لقراءات الأشعة فوق البنفسجية و98.20% لـ LFS
قراءات، مع كلا الطريقتين تظهر خصوصية 100٪. تؤكد بساطة sCRAM وسرعتها وقابليتها للتكيف الميداني على قدرتها على مراقبة ASFV اللامركزية في إعدادات محدودة الموارد-، مما يوفر أداة قوية لاحتواء تفشي المرض.
في هذه الدراسة، قمنا بتطوير sCRAM، وهو نظام أساسي سريع وقابل للنشر ميدانيًا- لكشف ASFV يدمج PAM-CRISPR/Cas12a دون المستوى الأمثل مع التضخيم متساوي الحرارة متعدد الإنزيمات. يحقق الاختبار حساسية -نسخة واحدة/نسخة واحدة/uL خلال 20 دقيقة ولا يُظهر أي تفاعل متقاطع مع مسببات أمراض الخنازير الرئيسية. أظهر التحقق السريري عبر عينات الدم والبلازما والمسحة توافقًا كاملاً مع qPCR باستخدام قراءات ضوء الأشعة فوق البنفسجية ودقة بنسبة 98.20% عبر شرائط التدفق الجانبي. من خلال التشغيل المبسط، والحساسية والنوعية العالية، وتفسير النتائج المرئية، يوفر sCRAM إمكانات قوية -لمراقبة ASFV في الموقع وتطبيقات تشخيص-الرعاية الأوسع.
