التهابات الجهاز التنفسي الحادة هي أمراض تنفسية شائعة عند الأطفال ، وغالبًا ما تسببها الفيروسات. الفيروس المخلوي التنفسي (RSV) والفيروس الغدي التنفسي (ADV) هما من مسببات الأمراض الشائعة التي تسبب التهاب الجهاز التنفسي الحاد عند الأطفال. يمكن أن تسبب الحالات المعتدلة أعراضًا باردة بشكل عام مثل السعال والأنف السائل ، في حين أن الحالات الشديدة يمكن أن تسبب مضاعفات شديدة مثل الالتهاب الرئوي والتهاب الأذن الوسطى. وفقًا لتوصيات منظمة الصحة العالمية ، يجب أن يكون اكتشاف مسببات الأمراض سريعة ودقيقة وحساسة ومحددة ويجب ألا تعتمد على الفنيين المتخصصين أو الأدوات الكبيرة. لذلك ، من المهم بشكل خاص تطوير طريقة اكتشاف لـ RSV و ADV التي يمكن أن تلبي متطلبات الكشف أعلاه.
نشرت مجموعة الأبحاث للمخرج MA Dongli من معهد طب الأطفال في مستشفى شنتشن للأطفال مقالاً "مقايسة تضخيم البوليميريز المتعددة الإرسال مع CRISPR/ CAS12A للكشف عن فيروس المخلوق التنفسي والفيروسات الغامضة في المجلة" في مجلة "التقارير العلمية" ، مع عامل تأثير 4.6.
نظرة عامة على البحث
يتم الجمع بين تقنية تضخيم الحمض النووي السريع المتساوي متعدد الأنزيم مع نظام الكشف عن CRISPR/CAS. من خلال تصميم الاشعال mira و crispr rNAs (cRRNAs) ، وإجراء مقارنات متعددة التسلسل ، وتحسين ظروف التفاعل ، واستخدام أجهزة الكشف العددي مضان للتحقق من الحساسية والخصوصية.
واستخدام نتائج QPCR كعنصر تحكم مقارنة ، تمت دراسة اتساق نتائج الاختبار لعينات مسحة الحلق السريري 160.
النتائج التجريبية
1. حساسية وخصوصية طريقة اكتشاف miRA-CRISPR/CAS12A
في اكتشاف طريقة MIRA ، يتم استخدام زوج التمهيدي RSV-F1/R1 لتضخيم الأحماض النووية من عينات مسحة الحلق من RSV أو ADV أو PIV أو RHV أو MP أو CP أو FLUB أو HMPV أو FLUA أو RSV/ADV. باستثناء RSV و ADV ، التي تضخمت العصابات ، كانت النتائج الأخرى سلبية ، مما يشير إلى أن الاشعال الميرا المختارة لم تتفاعل مع مسببات الأمراض الثمانية الأخرى التي تم اختبارها وتم حفظها جيدًا.
بعد ذلك ، تم تخفيف البلازميدات المؤتلف RSV و ADV 10 وقت باستخدام مياه معقمة ، وكانت حدود الكشف عن RSV و ADV 106نسخ/مل.
(1-10: عينات مسحة الحلق من المرضى الذين يعانون من RSV ، RSV/ADV المشترك ، وعينات مسببات الجهاز التنفسي الأخرى على التوالي)
2. قارن مع qPCR
بالمقارنة مع طريقة QPCR ، فإن حدود اكتشاف RSV و ADV هي كلا 103 نسخة/مل
(حساسية اكتشاف qPCR من RSV و ADV)
تعتبر طريقة MIRA-CRISPR أكثر ملاءمة للمختبرات الشعبية ، مع وقت الكشف القصير ، والتشغيل البسيط ، ولا حاجة إلى أدوات QPCR واسعة النطاق لاستكمال العمليات التجريبية.
3. مقارنة العينات السريرية
تم جمع عينات مسحة الحلق من 160 طفل يعانون من التهابات الجهاز التنفسي الحاد. في الوقت نفسه ، تم استخدام طريقة mira-crispr وطريقة QPCR للكشف ، وتم مقارنة النتائج مع نتائج التجربة السريرية.
بالمقارنة مع طريقة QPCR ، كانت حساسية طريقة miRA-CRISPR لـ RSV و ADV 98.1 ٪ و 91.4 ٪ على التوالي ، وكانت خصوصية الكشف 1 0 0 ٪. قيمة Kappa أكبر من 0.95 ، مما يشير إلى درجة عالية من الاتساق.
تتمتع طريقة MIRA-CRISPR بمزايا الكشف السريع والحساسي والمحدد لـ RSV و ADV. يمكنه اكتشاف الالتهابات الفيروسية على الفور ودقة ، وهو أكثر ملاءمة للاستخدام في المناطق ذات الموارد الطبية الشحيحة.