المكورات العنقودية المكورات العنقودية الدموية هي بكتيريا سالبة تجلطية إيجابية الجرام والتي هي شائعة جدا في المستشفيات. في السنوات الأخيرة ، كان هناك قلق متزايد بسبب المخاطر العالية للعدوى المكتسبة من المستشفى. يمكن أن يسبب الانحلال المكورات العنقودية الذهبية التهاب الجلد والتهاب السحايا والتهاب الصفاق وحتى الإنتان. يمكن أن يؤدي التأخير في التشخيص السريري إلى تدهور في الحالات الصحية ، لذلك فإن التشخيص السريع للمكورات العنقودية الثابتة هو مفتاح العلاج الدقيق.
نشرت مجموعة الأبحاث البروفيسور جي تو من وزارة المختبر المركزي لمستشفى ليانيونغانغ الثاني للأشخاص مقالاً "اكتشافًا سريعًا ومرئيًا للمكورات العنقودية المكورات المكورات العنقودية في العينات السريرية مع MIRA-LFS" في المجلة "Analytica Chimica Acta" ، مع عامل التأثير 6.2.
نظرة عامة على الدراسة
في هذه الدراسة ، أنشأت مجموعة البروفيسور جي تو طريقة لاكتشاف التحلل العنقوهيري من قبل Mira-LFS استنادًا إلى جين MVAA ، واستخدمت تقنية التضخيم الحمضية النووية السريعة ذات درجة الحرارة متعددة الإنزيم. تم إجراء التجربة في 37 درجة وتم اكتشاف النتائج في غضون 9 دقائق مع حساسية الكشف عن 0. 147 CFU/رد الفعل. طريقة الكشف عن MIRA-LFS مناسبة للكشف عن النقطة الثابتة للمكورات العنقودية الدموية في العينات السريرية ، وتدرك طريقة تحديد المكورات العنقودية المكورات المكورات العنقودية من قبل POCT ، والتي هي ذات قيمة كبيرة للتشخيص السريع وعلاج الأمراض في المناطق التي لا تقم. استخدمت مجموعة الأبحاث MIRA-LFS و QPCR وأساليب الثقافة البكتيرية التقليدية لتحليل 95 عينة سريرية عشوائية ، وأكدت قابلية التطبيق السريري.
طرق البحث
يظهر مخطط تخطيطي لاختبار MIRA-LFS أعلاه. في هذه الدراسة ، تم استخدام مجموعة التضخيم السريع لدرجات الحرارة في مجال التكنولوجيا الحيوية (نوع شريط اختبار الذهب الغروي) وشريط اختبار الكشف عن الحمض النووي.
كان طول التمهيدي لجين mvaa 30-35 النيوكليوتيدات ، وتم تصميم طول منتج التضخيم 100-350 bp ، وتم تصميم ما مجموعه 6 أزواج من الاشعال المرشحة. تم استخدام GDNA من سلالات المكورات العنقودية الذهبية القياسية لتحليل MIRA ، وتم فحص الاشعال المرشحة ، وتم تصور المنتجات المتضخمة من خلال 2 ٪ agarose هلام الكهربائي.
(يتم عرض منتجات التضخيم باستخدام agarose gel electrophoresis)
ثم تم تصميم المسبار وفقًا لتسلسل التمهيدي للأمام (16 نقطة أساس للخلف). يتم تصنيف نهاية 5 'من المسبار بـ FITC ويتم تصنيف نهاية 3' C3. يتم استبدال نوكليوتيد {4}}} في المسبار بـ THF على مسافة 30 نقطة أساس من نهاية 5 'و 15 bp من النهاية 3'. يتم تصنيف نهاية 5 'من التمهيدي العكسي المحدد مع البيوتين.
(مخطط تخطيطي لعملية التعديل والتعديلات التسلسلية لمجموعات التمهيدي)
بالإضافة إلى ذلك ، تم تحسين ظروف التفاعل للكشف عن MIRA-LFS بواسطة المكورات العنقودية المكورات العنقودية. يتم إجراء الاختبارات في 37 درجة من 4-12 دقيقة على فترات 2 دقيقة. يتم عرض النتائج في وقت رد الفعل 8 دقائق ، وخط الاختبار واضح بشكل واضح. بالإضافة إلى ذلك ، يتم إجراء الاختبار من 22-52 على فترات 5 درجة. 37-42 الدرجة هي درجة الحرارة الأنسب للكشف عن MIRA-LFS. لذلك ، كان وقت التفاعل الأمثل ودرجة حرارة طريقة mira-lfs للمكورات العنقودية الدموية 8 دقائق و 37 درجة ، على التوالي. جنبا إلى جنب مع حقيقة أن النتيجة النهائية تصور من قبل LFS في غضون دقيقة واحدة ، فإن إجمالي وقت الكشف هو 9 دقائق.
(تحسين وقت التفاعل ودرجة الحرارة)
النتائج التجريبية
1. التحقق من الحساسية
تم اختبار تركيزات مختلفة من الحمض النووي الجيني (gDNA) التي تم الحصول عليها من التخفيفات التسلسلية للمكورات العنقودية المكورات العنقودية (1 {2}}^6-10^0 cfu/ml) ل mira-lfs.
(إشارة إيجابية بتركيزات مختلفة)
أظهر تحليل الانحدار الاحتمالي للوحدة أن LOD 95 ٪ الذي تم تحديده بواسطة مقايسة MIRA-LFS كان 0. 147CFU/رد الفعل.
(الحد من حساب الكشف)
2. التحقق من صحة الخصوصية
تم تحديد انتقائية اكتشاف MIRA-LFS من خلال تحليل 18 سلالة من الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض و 15 سلالة من المكورات العنقودية الإكلينيكية. أظهرت النتائج أن اختبار MIRA-LFS كان سلبيًا لجميع البكتيريا المسببة للأمراض الثمانية عشر ، وإيجابية لـ 15 عينة سريرية تم التحقق منها من المكورات العنقودية المكورات العنقودية الذهبية.
(تم اختبار 8 سلالات من البكتيريا المسببة للأمراض و 15 سلالة من العقدية الانحلالية السريرية ، على التوالي)
مقايسة MIRA-LFS لها انتقائية عالية وهي مناسبة لفحص المكورات العنقودية الدموية.
3. اختبار العينة الفعلي
تم جمع ما مجموعه 95 عينة بشكل عشوائي من مستشفى ليانيونجانغ الثاني للأشخاص ، بما في ذلك 35 عينة من الجلد والأنسجة الرخوة ، و 16 عينة من البول ، و 14 عينة من البلغم و 30 عينة من الدم.
(تم اختبار 95 عينات سريرية بطرق مختلفة)
أظهرت النتائج أن طريقة الكشف كانت تتفق بنسبة 100 ٪ مع طريقة QPCR. بالإضافة إلى ذلك ، بالمقارنة مع المعيار الذهبي (GB/T4789. 11-2003) ، كانت حساسية وخصوصية اختبار MIRA-LFS لتحديد عدوى المكورات العنقودية المكورات العنقودية 100 ٪ و 98.73 ٪ ، على التوالي. هذه النتائج كذلك التحقق من صحة الجدوى التقنية للطريقة في اكتشاف المكورات العنقودية الدموية في العينات السريرية.
يتم استخدام طريقة MIRA-LFS للكشف السريع عن المكورات العنقودية الدموية من قبل POCT ، وهو فعال ودقيق وبسيط وفعال من حيث التكلفة ، وهو مفيد لقرارات التشخيص والعلاج السريع.